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检测分析:凝血检测分析前的影响因素
时间:2022-03-04

检测分析:凝血检测分析前的影响因素

凝血检查不仅是出血性疾病,易栓症的筛查手段,还用于华法林疗法的inr监测,普通肝素疗法的aptt监测以及狼疮抗凝物检测等与临床风险直接关联的检查,所以,正确的数据报告极为重要。而且,凝血检查与其他的临床检查相比,对样本的质量更为严格,如果不能正确地采集,制备和保存样本,就不能获得正确的数据。而一系列的检查步骤可分为分析前,分析中,分析后。plebani和 carraro分析了40,490份为期3个月的帕多瓦大学医院实验室的结果,其中 ** 个标本存在误差 (0.47%),而当中13%在分析中,18%在分析后,而68%在分析前,今天我们来聊聊凝血检测分析前的主要因素有哪些?

 

通常可归纳为四点:

1.病人:状态;

2.样本:采血;样本处理

3.试剂:溶解;处理

4.分析仪:状态;机械;维护保养

一、病人差异因素:

1.饮食:富含维生素k对华法林有反作用(inr下降);

2.月经,妊娠,绝经:不同的状态凝血功能不一样;

3.药物:阿司匹林,华法林,肝素等影响凝血和血小板功能;

4.肥胖:促凝因子增加,纤溶功能减弱,at和pc活性升高;

5.吸烟:与心血管疾病有关, fvii抗原和活性升高 ;

6.酒精:酒精能够抑制血小板的功能;

7.年龄:许多凝血因子随着年龄的增加而升高;

8.性别:女性出血时间更长;

9.血型:o型血的vwf和fviii比非“o”型血活性低。

二、样本影响因素:

样本的质量最为重要,因此控制好样本的采集程序非常必要;样本采集的方法,抗凝剂的选择(类型和用量),样本的用量,样本储存复溶和稳定性都直接影响我们的检测结果。

1.静脉穿刺:

正确:clsi 推荐采用含有抗凝剂的真空采血装置,如果使用注射器,需要使用小容量的注射器(≤20 ml),材质使用塑料或硅化的玻璃;根据采血量、病人的年龄、静脉的大小决定合适规格的针头 如果使用静脉留置管采样,首先吸取5ml血液润洗管道,减少肝素的污染(静脉留样针);

错误:止血带压迫时间延长导致组织液渗出和溶血,理想的情况应该是止血带使用时间不超过1分钟;使用注射器/针头会增加溶血和凝血的风险,抽血不顺利会影响结果;特别需要注意避免创伤引起溶血,小的针头会引起血小板的破坏和溶血;

clsi推荐的采血顺序:

凝血样本应该放在第二或第三管,顺序如下:

血培养管普通血清玻璃管凝血样本枸橼酸钠抗凝管凝胶血清分离管/普通血清塑料管 肝素管edta血常规管葡萄糖管

2.样本管的混匀:

正确:血液进入试管后,轻轻的颠倒混匀3到4次;推荐枸橼酸钠浓度 105 to109 mmol/l, 3.13% to 3.2%;

 

错误:不要使用试管摇床,混匀次数用力过猛或次数过多,容易引起溶血和血小板激活,产生气泡;其他浓度(3.8%)和其他抗凝剂(例如:草酸钙,肝素,edta)

3.血液/抗凝剂比率:9:1

抗凝剂量:1.85*10-3*(100-hct)*血量

标本量少于90%时,会影响aptt结果;

标本量少于80%时,会影响pt结果;

当充盈不足,血液/抗凝剂比例下降,导致结果假性延长,

当充盈过度,血液/抗凝剂比例升高,引起结果错误或标本凝固

 

4.抗凝剂浓度调整:

当压积大于55%,需要调整抗凝剂比例;

对压积低于20%的血液,暂时没有推荐的调整比例;

5.离心要求:

正确:使用水平式转子离心机,使用新鲜样本,获得乏血小板血浆(plt < 10,000/ml):常温状态下,离心力 1500 g 至少离心 15分钟;plt大于200,000/ml,pt/inr, aptt 和 tt不受影响;

错误:血小板浓度高会引起la假阴性;血小板的存在是对肝素治疗的监测产生干扰pf4 中和肝素导致aptt不延长;

6.运输和储存:

试管不闭盖 = co2丢失= ph升高 = pt 和 aptt延长;

温度过高 = fv 和 fviii 降解 = pt 和 aptt延长;

温度过低 (2- 4oc) = 冷激活 fvii = pt 缩短,尤其是没有硅化处理的枸橼酸钠试管;

 

检测时间和保存温度如下:

tt、pc、因子v、因子viii等自血液样本采集之时起,4小时内必须完成离心和检测;如果不能在规定的时间内运输到达目的地,必须离心分离血浆并且冰冻保存,-20℃2周以上,-70℃6月以上,不要使用无霜冰箱,当冰冻血浆可以在37℃快速复溶并立即检测,样本检测前在4℃ 最多放2 小时。

 

三、试剂的影响因素:

试剂: 溶解——处理

1)试剂相关的问题:

需要严格按照说明书要求做:ccls 指南推荐i级水用于凝血试验,试剂要求使用双蒸水;商业化的水,无需检查电阻,微生物数量等;高ph会使凝固试验时间延长,混浊的水会有污染或存在钙离子。

常见水质分级:

i级水:用于配置试剂,要求干扰最小

ii 级水:用于常规检测方法

iii级水:用于冲洗玻璃器皿

2)溶解程序:不正确的溶解比例或量,污染常常是误差的来源;

①移液管,加样枪头等

②被污染的水(水里含有防腐剂或微生物或抗生素等)

③使用不干净的容器或搅拌棒

④残留的清洁液

3)溶解后的储存:注意试剂和质控的有效期,在效期内使用,不用时闭盖2-8°c保存。

 

四、分析仪器的影响因素:

分析仪器:状态——机械——维护保养

1.机械方面:吸样和分配,混匀,温度,光路

吸样和分配:当样本和试剂量不准确不精密

1) 针或管路有气泡

2) 针外壁脏

3) 堵针

4) 样本或试剂的注射器单元故障

5) 针的未知错误

当出现以上情况,会发生重复性差,凝固时间延长,不凝固。

2.仪器故障:仪器故障或检测程序错误

1) 混匀功能减弱

2) 孵育时间激活时间不正确

3) 温度异常

4) 试剂飞溅污染

5) 电磁干扰

当出现以上情况会发生重复性差.结果不准确;

3.获得准确结果,找到问题修理故障:

采用备用的仪器或方法确认,检查程序-重新分析-手工分析或其他方法,另外每天执行维护保养,尤其是采用厂家推荐的清洁液,并每天执行清洗及质控检测。

总结:

凝血检测和其他血液检查相比,从样本采集到试剂样本的制备,其好坏会很大程度地影响到检测结果,而检测误差会导致误诊和错误的临床判读,可能对患者带来极大的危险,因此我们需要在检测时进行严格的质控管理,保证结果的可靠性。

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